第五篇 舉足左右，便有輕重的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
第一篇提到醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)大多數(shù)項(xiàng)目都為相對測量，主要依靠物質(zhì)進(jìn)行量值傳遞，臨床標(biāo)本測量值的正確與否與校準(zhǔn)物濃度（賦值）直接相關(guān)，那校準(zhǔn)物的濃度怎么確定才能保證臨床檢驗(yàn)結(jié)果正確？舉例來說，現(xiàn)有甲、乙兩個廠家的血糖試劑，甲廠家試劑使用甲自己的校準(zhǔn)物，乙廠家試劑使用乙自己的校準(zhǔn)物，2個試劑測試同一份患者標(biāo)本，得出的結(jié)果很大可能性會不可比。如果甲廠家的校準(zhǔn)物與一個公認(rèn)的物質(zhì)有關(guān)聯(lián)（校準(zhǔn)、比較），乙廠家的校準(zhǔn)物也與這個物質(zhì)有關(guān)聯(lián)，那么再測試同一份患者標(biāo)本，得出的結(jié)果能可比的可能性就比較大了。這就是計(jì)量溯源性，通過這個過程，將國際公認(rèn)的測量標(biāo)準(zhǔn)的正確度傳遞到臨床樣品，保證了測量結(jié)果準(zhǔn)確可比。計(jì)量溯源性研究中，有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM）特別重要，是源頭，是基礎(chǔ)。
據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目接近2000項(xiàng)，常用診斷試劑品種多達(dá)數(shù)千種，IVD試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)際需求量約為1000種。當(dāng)前，全世界可用于IVD的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)約有300種，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)品種少、供給不足是普遍問題。本篇主要介紹CRM的一般要求，下一篇重點(diǎn)介紹CRM的研制技術(shù)路線。
1、CRM的定義、分級
在IVD領(lǐng)域，有證參考物質(zhì)應(yīng)符合ISO 15194（GB/T 19703）《體外診斷醫(yī)療器械 生物源性樣品中量的測量 有證參考物質(zhì)及支持文件內(nèi)容的要求》的要求。
這里再回顧一下CRM的定義：附有由權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布的文件，提供使用有效程序獲得的具有不確定度和溯源性的一個或多個特性量值的參考物質(zhì)。在定義中，不確定度既包括“測量不確定度”，也包括“名義特性的不確定度”，例如序列和鑒定，以概率表示。溯源性既包括量值的“計(jì)量學(xué)溯源性”，也包括“名義特性的追溯性”。這說明CRM既包括定量用的RM，也包括定性用的RM。
CRM 分為三個等級：原級測量標(biāo)準(zhǔn)（primary measurement standard）、次級測量標(biāo)準(zhǔn)（secondary measurement standard）和國際約定校準(zhǔn)物（international conventional calibrator）。原級測量標(biāo)準(zhǔn)是指量值及其測量不確定度是使用原級參考測量程序建立的測量標(biāo)準(zhǔn)。次級測量標(biāo)準(zhǔn)是指量值和測量不確定度是通過使用同類量的原級測量標(biāo)準(zhǔn)對其進(jìn)行校準(zhǔn)而建立的測量標(biāo)準(zhǔn)，例如NIST 1911c（已知純度的膽固醇參考物質(zhì)）是原級測量標(biāo)準(zhǔn)，NIST 1951b（冷凍人血清脂類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）是次級測量標(biāo)準(zhǔn)。國際約定校準(zhǔn)物是指量值不能溯源至SI單位，但其賦值得到國際公認(rèn)，例如WHO的一些International Biological Reference Preparations（IRP）。
在這里提一下，我們國家的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，常有朋友問這與原級測量標(biāo)準(zhǔn)、次級測量標(biāo)準(zhǔn)相對應(yīng)嗎？這2種分級的標(biāo)準(zhǔn)不一樣，既有聯(lián)系，又有區(qū)別，不完全一致。
CRM應(yīng)具有計(jì)量學(xué)特性，是指標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性量值應(yīng)采用計(jì)量學(xué)上有效程序（最理想是溯源到SI單位）確定，具有不確定度和溯源性，能在校準(zhǔn)等級序列中作為較高等級計(jì)量學(xué)水平的測量標(biāo)準(zhǔn)，或作為較高計(jì)量學(xué)水平上的正確度控制物質(zhì)。用于IVD的CRM還應(yīng)具有互換性。互換性不是IVD的專有術(shù)語，但I(xiàn)VD領(lǐng)域特別強(qiáng)調(diào)和重視參考物質(zhì)的互換性，因?yàn)槲覀兯械臏y量活動最終面對和服務(wù)的都是人血液、尿液、腦脊液、組織等復(fù)雜的生物樣本。在VIM中對互換性是這么定義的:對于給定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的規(guī)定量，由兩個給定測量程序所得測量結(jié)果之間關(guān)系與另一個指定物質(zhì)所得測量結(jié)果之間關(guān)系一致程度表示的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性。通俗地講，參考物質(zhì)的互換性是指參考物質(zhì)與臨床樣本的接近程度，越接近，那么它在不同檢測系統(tǒng)上的檢測結(jié)果就越趨于一致。新版ISO 17511里，對于參考物質(zhì)的互換性，專門有一節(jié)進(jìn)行詳細(xì)論述，大致內(nèi)容歸納如下：原級參考物質(zhì)和原級校準(zhǔn)物，通常是純物質(zhì)，用于參考測量程序的校準(zhǔn)，一般不要求有互換性；次級參考物質(zhì)（次級校準(zhǔn)物）和工作校準(zhǔn)物宜進(jìn)行互換性的評價；如果一個有證參考物質(zhì)，不能證明其互換性，通過糾正因子或者糾正函數(shù)，仍然可以使用；在缺乏CRM或國際約定校準(zhǔn)物的情況下，可以使用有互換性的panels或者pools；終端用戶校準(zhǔn)物（產(chǎn)品校準(zhǔn)物），如果不具備互換性的，可以采用糾正因子或者糾正函數(shù)。工作中，大家常常參考CLSI EP30這個文件開展互換性評價。 如果物質(zhì)的一部分（單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值沒有顯著差異，則認(rèn)為該物質(zhì)的該特性是均勻的。物質(zhì)內(nèi)部和單元之間或多或少會存在有不均勻性，在貯存過程中，也會發(fā)生層析、偏析、聚集等不均勻的傾向，因而均勻是相對的，而不均勻是絕對的，完全均勻的物質(zhì)是不存在的。 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在規(guī)定的時間和環(huán)境條件下，其特性量值應(yīng)保持在規(guī)定的范圍以內(nèi)，這種特性亦被稱之為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性。研制(生產(chǎn))者要保證所提供的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在一定期限內(nèi)其特性量值不發(fā)生顯著改變。為得出這一期限，研制者在研制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)過程中必須要進(jìn)行穩(wěn)定性考察，量值不穩(wěn)定的物質(zhì)不能用來制備標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。我國規(guī)定一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性一般應(yīng)大于1年，二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性大于6個月。量值準(zhǔn)確可靠是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的重要特征之一，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)準(zhǔn)確度高且具有規(guī)定的不確定度，因而才能夠成為計(jì)量學(xué)溯源鏈的重要單元，用于測量儀器的校準(zhǔn)或檢定、測量方法的評價或確認(rèn)，以及測量審核與能力驗(yàn)證等量值傳遞或溯源有關(guān)的活動。從這個意義上來說，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)必須在有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室，由具有一定資質(zhì)和經(jīng)驗(yàn)的操作人員，用準(zhǔn)確可靠的測量方法進(jìn)行定值測量。有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)帶有特定的“證書”，它是介紹標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性的主要技術(shù)文件，是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制者(生產(chǎn)者)向使用者提供的質(zhì)量保證書。證書上需注明該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的認(rèn)定(標(biāo)準(zhǔn))值、不確定度、正確使用方法、運(yùn)輸與貯存應(yīng)注意的有關(guān)事項(xiàng)等。證書的編寫與內(nèi)容應(yīng)符合IS0導(dǎo)則31、ISO 15194和國家相關(guān)要求。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)有足夠的批量和儲備，以滿足測量工作對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)際需要。
這就是上面說的互換性，為避免量值傳遞過程中的誤差產(chǎn)生，最好應(yīng)選擇與待測物質(zhì)性質(zhì)和組成相近似的物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的候選物，這是研制和使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)遵循的一條原則。IVD有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)從上世紀(jì)50年代開始起步，也經(jīng)歷了從純物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)到血清等基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的發(fā)展歷程。
目前標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，特別是具有良好互換性的基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)嚴(yán)重不足，加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制將成為國內(nèi)今后一段時間內(nèi)IVD行業(yè)的重要工作。
往期鏈接：
1、體外診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)品、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品那些事（一）
