審校：Young Wang (王永強博士)

翻譯：Trista, Joy, Deborah, Tiki

整理：Tiki

 

近期FDA發(fā)布了關于在COVID-19公共衛(wèi)生緊急事件期間批獲分子流感和RSV檢測的修正版執(zhí)行政策。由于許多流感和RSV測試使用的成分與SARS CoV-2分子分析的成分相同，因此制定了該項政策，以幫助在流感季節(jié)出現(xiàn)試劑耗材的短缺。該政策將有助于擴大獲得FDA批準用于檢測和鑒定流感病毒的分子檢驗的機會，包括那些識別RSV的流感檢測。

 

另外，F(xiàn)DA虛擬市政廳系列——立即生效的關于冠狀病毒（COVID-19） 診斷測試指南的發(fā)布（問答形式），CAIVD將重點內(nèi)容翻譯并提煉出來，以饗讀者。FDA參與直接審閱EUA和Pre EUA的人員大概100人左右，背后另有大量的以各種方式提供幫助的工作人員。本次問答內(nèi)容主要有關公共衛(wèi)生緊急情況下SARS CoV-2測試開發(fā)和驗證的技術(shù)問題。由CDRH的產(chǎn)品評估和質(zhì)量部門的體外診斷和放射衛(wèi)生辦公室主任Timothy Stenzel博士及體外診斷和放射衛(wèi)生辦公室副主任Toby Lowe博士帶來簡短的更新報告。

 

 

Timothy Stenzel: 到本周為止，我們已經(jīng)批準了很多 EUA 授權(quán)，其中較為特殊的是我們授權(quán)了第一個抗原試紙法測試。它是把一個普通試紙放入檢測管中，已被授權(quán)用于即時檢測。很多人都對這種簡便價廉的檢測感興趣，而且這項抗原試紙檢測甚至不需要Cartridge。

 

這就是Quidel QuickVue SARS測試，和雅培BinaxNow一樣是一個非常簡單不用任何設備的抗原測試。我們認為它的獨特之處在于它可以顯著降低獲取檢測結(jié)果的成本所以它可以像雅培的BinaxNOW一樣大批量生產(chǎn)。

 

還有很多其他很好的抗原測試產(chǎn)品。我們一般優(yōu)先考慮批準的是那些對公共健康產(chǎn)生重大影響的申請，像居家檢測、居家采集、即時檢測以及超大容量的中心實驗室測試。我們主要考慮診斷檢測，但也關注血清學測試。

 

我想討論的另一個話題是新冠病毒變異。發(fā)生在英國的新冠病毒變異株在美國夜成為一個令人擔憂的問題，我們已經(jīng)看到一些確診病例。南非的變異株與英國的變異株有一些重疊的突變，但也存在明顯的差異。

 

由于病毒突變并增強了與受體的結(jié)合，這兩個變異似乎都具有較高的傳染性。有證據(jù)可以證明這一點。其中一些可能具有更高的病毒載量，然后與受體產(chǎn)生更強的結(jié)合以致產(chǎn)生更大的影響。因此，了解正在流行的變異株是很重要的。我們對基于測序的檢測很感興趣，這種檢測可以提供完整的基因組序列。而且我們已經(jīng)授權(quán)了至少一個這種類型的試劑——Illumina試劑盒。值得提出的是我們在了解變異的重要性之前它已被授權(quán)。

 

FDA一直在做的另一件事是定期要求所有申請者，尤其是分子檢測的申請者，在授權(quán)過程中至少檢查兩次已知的變異序列，并闡明在已知數(shù)據(jù)庫中有關這些變異其引物和探針設計可能會產(chǎn)生的任何問題。

 

此外，F(xiàn)DA具有生物信息學分析能力。我們擁有所有EUA授權(quán)的分子引物和探針的清單。我們一直在查詢測序數(shù)據(jù)庫，以查看是否存在任何可能影響測試性能的突變。我們已經(jīng)分析了出現(xiàn)在英國和南非的變異毒株。在此之前，我們也已經(jīng)對數(shù)據(jù)庫中出現(xiàn)的任何變異進行了此操作，這些變異是數(shù)據(jù)庫中序列的5％或以上。

 

今天談的英國新冠病毒變異株，至少有一項測試被公開提及是具有S基因缺失的Thermofisher Attack Path Assay。由于S基因缺失，我們研究了美國數(shù)據(jù)庫中許多變體和序列。到目前為止，大多數(shù)并沒有英國變異株的特征。目前在美國只有一個子集-Thermofisher的S基因缺失。我們認為大約5％的Thermofisher陽性患者有S基因缺失。但是，我們認為迄今為止，絕大多數(shù)并未攜帶英國變異株。因此，目前我們建議至少對S基因缺失樣本進行序列驗證，Illumina的EUA授權(quán)的測序分析可以滿足該需求。

 

 

Q1：使用分子檢測作為快速抗原檢測的比測儀時，出于報告目的，哪種與傳染性相關的CT臨界值是合適的？

 

A：我們沒有使用CT臨界值或某種傳染性臨界值，因為實際上CT的差異很大。對于快速的抗原檢測，我們發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)癥狀的前五天CT高達40。目前還尚不確定具體原因。但是我們非常清楚地看到，在癥狀出現(xiàn)的前五到七天內(nèi)，出現(xiàn)了一些高CT結(jié)果。因此，我們認為重要的是當出現(xiàn)癥狀時，我們能夠得知抗原檢測的真實性能。

 

所以我們會建議直接進行抗原檢測。大部分試劑在五到七天的癥狀期內(nèi)的檢測已獲得批準。我們想了解接受抗原檢測且被確診為新冠陽性患者的檢出率是多少。

 

 

Q2：如果將臨床驗證作為篩查測試，陽性和陰性PCR病例的最低建議數(shù)量是多少？

 

A：如果您要進行無癥狀篩查，并且這是您第一個也是唯一的研究，那么我認為您需要30陽性病例。如果您要將其添加到已授權(quán)的檢測中，或者是與首次EUA授權(quán)期間同步進行。我們相信最低限度取決于在上市前或獲得授權(quán)前至少有10個陽性無癥狀患者的病例。

 

如果您要進行抗原測試，建議您進行一項研究，以最大程度地了解無癥狀人群的真實表現(xiàn)。因此，正如我所說的，抗原檢測在癥狀的前五到七天內(nèi)達到最高峰。病毒水平和其中的隱匿峰值通常在該段時間內(nèi)達到高峰。它可能提前一些但通常不會推遲。經(jīng)過一個星期的病毒隱匿后，抗原檢測性能隨之下降。雖然好的分子檢測可能在14天后仍能呈陽性，但是有些病例會出現(xiàn)癥狀，這就超出了癥狀學研究范疇。

 

因此，一種最佳的研究設計是將一系列串行檢測項目聯(lián)系起來，這將使您有最好的機會展示出抗原檢測的優(yōu)異性能。使用分子比測儀進行每周至少一次的篩查，該分子比測儀可以用作無癥狀研究的記錄比測。這樣您可以豐富自己的數(shù)據(jù)庫，同時可以等到有人通過篩查確認陽性。與確診者聯(lián)系，看看他們是否愿意接受新試劑測試。希望至少使用相同數(shù)量的陰性，以確?？煽啃?。也許這是最好的方法來豐富無癥狀的病毒水平，希望能看到較好的抗原性能測試。

 

 

Q3：關于不同測試EUA審批的優(yōu)先順序是怎樣的？

 

A：POCT檢測，家庭測試，家庭采樣，主要聚焦在診斷測試，即分子和抗原測試。但也會優(yōu)先考慮血清學類的檢測。之后是高通量的中心實驗室檢測，這有助于縮短測試結(jié)果的周轉(zhuǎn)時間，在自動化平臺或自動化系統(tǒng)上。這些均屬于優(yōu)先事項。

 

 

Q4：就血清學而言，目前疫苗接種正在實施，F(xiàn)DA對注射疫苗的個人的血清學測試有什么看法？

 

A：疫苗是由生物制品評估和研究中心 (CBER) 審查的，需要將問題遞交該中心給予答復。據(jù)已知數(shù)據(jù)，血清學可以以各種方式進行預測，這對審查與疫苗有關的任何提交材料都很重要。在授權(quán)臨床醫(yī)生使用的各種血清學測試中都沒有禁止對其進行評估。必須謹慎的是，目前FDA沒有授權(quán)任何血清學試驗用于任何目的，無論確定是否需要疫苗，還是確定疫苗已經(jīng)生效或者已經(jīng)具備相應的免疫力。也沒有授權(quán)對免疫申請進行血清學測試。FDA已批準半定量血清學試驗和中和抗體血清學試劑。

 

 

Q5：接種疫苗的人血清學測試將如何進行，是否會出現(xiàn)假陽性？如果有人接種了疫苗，是否能分辨出已經(jīng)產(chǎn)生出了抗體？

 

A：目前沒有授權(quán)這類試劑。研發(fā)疫苗抗體可能與研發(fā)實際新冠感染抗體非常相似，是一項非常重要的試驗，需要特定的要求，F(xiàn)DA會考慮設計但仍需要多方考量。

 

 

Q6：關于質(zhì)控的使用，F(xiàn)DA對抗原測試的內(nèi)標有何建議？

 

A：有內(nèi)標可以評估樣本的質(zhì)量，但這不是EUA授權(quán)的要求。關于此類內(nèi)標的唯一要求或建議迄今為止是家庭采集樣本，我們不清楚患者是否自己采集了足夠好的樣本，用于沒有內(nèi)標對照的分析。FDA已經(jīng)更新了一些帶有內(nèi)標項目的授權(quán)，在家庭測試中評估性能，查看了數(shù)千個數(shù)據(jù)，并且在某些情況下不再對內(nèi)標進行要求。但對于現(xiàn)在新的研發(fā)機構(gòu)與新的家庭采集，我們希望看到這些數(shù)據(jù)。

 

 

Q7：您是否能評論一下對于快速抗原檢測可接受的富集策略，特別是篩查每個來COVID檢測中心的人是否存在新冠病毒感染的癥狀是可以接受的富集策略？

 

我們在找陽性病例，他們有的有癥狀，有的沒有癥狀。為了嘗試獲得癥狀陽性而不是無癥狀的聲明，我們想篩選在過去8天內(nèi)出現(xiàn)癥狀或在8天前開始出現(xiàn)癥狀的人。

 

A：我認為這不是一個特別好的研究設計。由于目前陽性率很高，只要看到有癥狀的病人，就可以得到至少30個陽性結(jié)果。在無癥狀檢測方面我們有極大的靈活性，要做好抗原檢測，應該是一個連續(xù)檢測的群體，將給抗原檢測提供最好的機會，在最初5-7天的病毒隱匿中展示其優(yōu)異的表現(xiàn)。如果您要繼續(xù)跟進的話，需提交一份Pre-EUA的申請進行評審，但并不推薦這么做。

 

 

Q8：CDC已經(jīng)同意針對現(xiàn)有獲EUA授權(quán)的檢測展開一些關于新冠病毒英國突變株的測試。這對于正在開發(fā)抗原檢測的研發(fā)人員來說也適用嗎？

 

A：我認為恰當?shù)臅r機可能是在已經(jīng)鎖定分析之后。因為最終在BEI庫中可能存在英國陽性變異的活病毒和/或經(jīng)輻照或血紅素激活的病毒，您還可以自行構(gòu)造偽病毒進行評估。但是我認為不一定要在開發(fā)的初期就讓CDC過載工作。

 

我們希望所有抗原檢測都不會受到影響，這很重要。我認為通過我們進行的首次測試，可能會得到一個不錯的方向。通常抗原檢測會將N基因作為目標，在某些方面，這可能比 spec 蛋白保守得多。

 

但是一旦您將其鎖定并準備提交，我就會開始著手檢查其進展狀態(tài)。因為此時此刻，如果能夠即時了解并反應評估針對英國變異株的檢測的試劑，這將對我們FDA而言也有很大幫助。我們希望和您一起關注產(chǎn)品的開發(fā)過程。

 

 

Q9：如果我們獲得了進行臨床驗證研究設計的許可，這是否也適用于510（k）？

 

A：當?shù)谝粋€De Novo在分子或任何其他相關的分類中被審批批準后，后續(xù)的每個檢測試劑都將提交510(k)。對于那些想要了解其轉(zhuǎn)化要求的開發(fā)人員，我們正在起草一份指導文件，但在初版的草案中或許不能全面介紹關于所有EUA產(chǎn)品的具體細節(jié)。

 

因此我們要求團隊起草一些可以與開發(fā)人員共享的信息。首先，在呼吸道傳染性抗原血清學和/或分子檢測中，新冠與其他傳染病中的標準抗原有所不同。所以我們的反饋將集中在新冠和我們的應對措施的不同之處上。我們敦促您查看我們最近針對De Novos和510(k)做出的決策摘要，其中包括針對呼吸道病毒測試相關特殊控制的所有常見問題。

 

我認為不需要急于轉(zhuǎn)換EUA 為510(k)。因為現(xiàn)在我們還有很多EUA申請要處理，并且每周都有很多新的申請。所以我們現(xiàn)在的重點仍將主要放在EUA的授權(quán)上。即使這終將迎來結(jié)束的時候，我們正在起草的指南也將提供一個非常合理的過渡時間，所以我們認為在轉(zhuǎn)換過渡時不會發(fā)生不合理的事情出現(xiàn)。

 

但是我非常明白我們將會要求很多的轉(zhuǎn)化，所以對于所有研發(fā)人員而言，開始考慮這些轉(zhuǎn)換是明智的。如果在重要的過渡點進行轉(zhuǎn)換對您而言很重要，那么可以在目前新冠流行時收集樣本，以進行轉(zhuǎn)化研究，進而為轉(zhuǎn)換EUA 為510(k)做準備。

 

 

Q10：您是否有跡象或信息表明CDC引物可能會受到正在傳播的突變的影響？

 

A：是的。一旦我們確定了無論是對分子，抗原或血清學檢測的潛在影響，我們將盡快將該信息公開化。用于CDC分析的引物和探針序列已經(jīng)公開發(fā)表，大家可以查看并了解突變以及它們?nèi)绾斡绊戇@些引物和探針的。