| 免疫學(xué)的發(fā)展史起始于微生物學(xué)研究，于18世紀(jì)建立，19世紀(jì)至20世紀(jì)中期進(jìn)入經(jīng)典發(fā)展期。這一時(shí)期，人們對(duì)免疫功能的認(rèn)識(shí)由人體現(xiàn)象的觀察進(jìn)入了科學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)期。20世紀(jì)初期到中期，進(jìn)入近代免疫學(xué)時(shí)期。從20世紀(jì)中期開始，真正進(jìn)入現(xiàn)代免疫學(xué)時(shí)期。現(xiàn)代免疫學(xué)的檢測基本歷經(jīng)了以下幾個(gè)過程。放射免疫技術(shù)：利用放射性同位素作為標(biāo)記物測量抗原抗體結(jié)合。酶聯(lián)免疫技術(shù)：利用活性酶作為標(biāo)記物的酶聯(lián)免疫板式化學(xué)發(fā)光：非均相，微孔板，板界面反應(yīng)，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)納米磁微粒管式化學(xué)發(fā)光：均相，管式，在溶液中反應(yīng)，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測，利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對(duì)檢測信號(hào)進(jìn)行放大和顯示，常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。免疫診斷在臨床診斷中占據(jù)著非常重要的地位，常見的免疫技術(shù)有放射性免疫、酶聯(lián)免疫、化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光、納米磁微?；瘜W(xué)發(fā)光。使放射性標(biāo)記抗原和未標(biāo)記抗原（待測物）與不足量的特異性抗體競爭性地結(jié)合，反應(yīng)后分離并測量放射性而求得未標(biāo)記抗原的量。用反應(yīng)式表示為：*Ag為同位素標(biāo)記的抗原,與未標(biāo)記的抗原Ag有相同的免疫活性，兩者以競爭性的方式與抗體Ab結(jié)合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab復(fù)合物,在一定反應(yīng)時(shí)間后達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。簡稱ELISA法，它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過顯色來檢測。使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度，ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）是一種高度敏感的微量測定技術(shù)，凡具有抗原性的物質(zhì)（包括半抗原）都可以用CLIA測定。CLIA起步于80年代初，快速發(fā)展于90年代。利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體(常用堿性磷酸酶-金剛烷胺、辣根過氧化酶-魯米諾衍生物、辣根過氧化酶-魯米諾衍生物），使其從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)。當(dāng)中間體從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)會(huì)釋放等能級(jí)的光子，對(duì)光子進(jìn)行測定而進(jìn)行定量分析。化學(xué)發(fā)光具有熒光的特異性，同時(shí)不需要激發(fā)光，避免了熒光分析中激發(fā)光雜散光的影響從而提高了靈敏度，并且避免了放射分析造成的環(huán)境污染和健康危害，是一種非常優(yōu)秀的定量分析方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）是一種高度敏感的微量測定技術(shù)，凡具有抗原性的物質(zhì)（包括半抗原）都可以用CLIA測定。CLIA起步于80年代初，快速發(fā)展于90年代。 
4.電化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理電化學(xué)發(fā)光（ECL）是電場參與化學(xué)發(fā)光所產(chǎn)生的結(jié)果，是指通過施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)：體系中電極表面的三丙胺TPA釋放電子，進(jìn)而釋放質(zhì)子成為自由基TPA＊，同時(shí)，二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+ 釋放電子成為三價(jià)的三聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]3+。具有強(qiáng)氧化性的三價(jià)的三聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]3+ 和具有強(qiáng)還原性的三丙胺自由基 TPA＊發(fā)生氧化還原反應(yīng)，結(jié)果使三價(jià)的三聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]3+ 還原成激發(fā)態(tài)的二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕[Ru(bpy)3]2+，激發(fā)態(tài) [Ru(bpy)3]2+衰變并以釋放出波長為 620nm 光子的方式釋放能量，而成為基態(tài)的 [Ru(bpy)3]2+。上述化學(xué)發(fā)光過程后，反應(yīng)體系中仍存在二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy)3]2+ 和三丙胺TPA，使得電極表面的電化學(xué)反應(yīng)過程可以繼續(xù)進(jìn)行。這樣，整個(gè)反應(yīng)過程可以不斷循環(huán)，測定信號(hào)不斷放大，從而使檢測靈敏度大大提高，所以 ECL 測定具有高靈敏的特點(diǎn)。5.磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫技術(shù)原理是將磁性分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、免疫分析技術(shù)三者結(jié)合起來的一種新興分析方法，該技術(shù)充分利用了磁性分離技術(shù)的快速易自動(dòng)化性，化學(xué)發(fā)光技術(shù)的高靈敏度性，以及免疫分析的特異性，在生物分析領(lǐng)域展現(xiàn)了不可替代的作用。目前，磁微?；瘜W(xué)分析免疫分析已經(jīng)應(yīng)用于管式化學(xué)發(fā)光免疫檢測項(xiàng)目以及電化學(xué)發(fā)光免疫檢測項(xiàng)目。磁珠用于化學(xué)發(fā)光領(lǐng)域的方法間接法就是包被抗原，然后用酶標(biāo)記的抗抗體檢測樣本中抗體，適合于檢測對(duì)象是自身抗體的情況。優(yōu)點(diǎn)：相對(duì)較方便，只要變換包被抗原就可以檢測不同的項(xiàng)目。缺點(diǎn)：標(biāo)本中的特異性抗體會(huì)競爭性的結(jié)合抗原，使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測定，因此測定IgM抗體多用捕獲法。原理如下圖，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，去除IgG后測定特異性IgM。指受檢抗體和酶標(biāo)抗體競爭性的與磁珠表面抗原結(jié)合。固相抗原競爭法基本原理如下圖所示。結(jié)合于固相載體的酶標(biāo)抗體與受檢抗體的量呈反比。若受檢樣本中無抗體，酶標(biāo)抗體能夠順利與抗原結(jié)合，出現(xiàn)強(qiáng)信號(hào)。若受檢樣本中有抗體，則競爭性的占去了酶標(biāo)抗體與抗原的結(jié)合，酶標(biāo)抗體的結(jié)合力減弱，信號(hào)強(qiáng)度減弱。雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，基本原理如下圖所示。在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hook effect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果（如圖， 雙抗夾心法及雙位點(diǎn)一步法。缺點(diǎn)：假陰性）
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