定標的意義:定標就是要找出一個參考點,就是確定一個K值(或F值)。它是由儀器與試劑的狀態(tài)確定下來的。當我們測定一個標本時,無論您是用手工的方法或全自動生化分析儀,測定出來的值只是一個吸光度,這個吸光度對我們沒有什么意義,我們要把這個吸光度轉換成一個濃度或是酶的活性。那就要乘上一個K值,計算并打印出來的結果對我們來說就是有意義的了。K值就是我們通過定標找出來的。一般上最低要求是有試劑空白與標準品。
經(jīng)過儀器測定出來兩個吸光度:
標準液的濃度是已知的,這兩個吸光度可以由儀器測出,這樣就可以得到一個K值。無論什么樣的標本,用其吸光度乘以K值我們就得到了答案。因此,K值具有非常決定性的意義,可以決定標本的準確性。
K值的決定因素:我們看看K值會受到什么影響呢?第一,標準液的濃度一定要準確(標準液最好與標本一樣是以血清為基質的)。第二,標準液的吸光度與試劑空白的吸光度一定要準確。吸光度受儀器狀況、試劑狀況的影響,如果您的儀器相當穩(wěn)定,試劑是影響K值的一個主要因素。
一般我們用質控血清來檢查,最好是兩種水平的質控來檢查,如果質控結果很好,可以說K值是準確的,用這個K值計算出來病人的結果也是準確的,所以K值非常關鍵。
K值的真面目:K值實際上代表了斜率,截距代表試劑空白,試劑空白每天都在變化,所以K值的穩(wěn)定性決定您的儀器與試劑,如果儀器與試劑都十分穩(wěn)定,那K值也很穩(wěn)定。
多長時間定一次標合適?這要看您試劑的穩(wěn)定性,質控結果不好,有些項目做試劑空白可以解決,有些項目要做兩點定標。
一是計算出來的理論K值:
二是用有酶項目的定標液得出K值:
目前很多公司可以提供多項目的定標液,不僅有底物類的項目,也有酶類的項目。
經(jīng)常有老師問我,定標通過了,可是結果咋還不好呢?我和老師開玩笑說:您給我一瓶可樂當做試劑(或定標液),我讓他定標就能通過。如何實現(xiàn)呢?可樂是有顏色的,參數(shù)中設定少加可樂多加水(AU儀器可以使用濃縮試劑),使用大一點的波長(目的是要讓吸光度在0.0000-2.5000之間),只要讓空白的吸光度和標準液的習慣度有一點點差距(這兩個的吸光度不能一模一樣,吸光度差為0,因數(shù)K值就變成無窮大),滿足以上條件后,定標就一定通過!
如果您使用的原廠試劑,原廠參數(shù)里面絕大多數(shù)項目會提供一個因數(shù)的范圍,如果您定標后的K值正好是因數(shù)范圍的中值,恭喜您,表明您這臺儀器的狀態(tài)和在廠家實驗室的狀態(tài)是一模一樣的。表明儀器的狀態(tài)、試劑的狀態(tài)、水機的狀態(tài)等等條件都非常非常的好。
如果您使用的國產(chǎn)儀器或者國產(chǎn)試劑,廠家并沒有提供因數(shù)的范圍,怎么辦呢?方法是自己摸索,每定標一次就記錄一次因數(shù),累計的足夠的次數(shù),自己就可以確定因數(shù)的范圍了,如果用錯了定標液定標就會失敗,老型號儀器儀器還是會用最后一次定標成功的K值來計算病人結果的,新型號的機型會沒有結果,所以定標后一定要觀察定標后的K值以及定標是否成功。
請不要反駁我,站在我的角度考慮,K值在靶值比質控在靶值更好,比如,樣品針有些微微堵塞,比如應該加樣量是2.0微升,由于堵塞加了1.8微升,由于定標質控的粘度差不多,定標液少加,質控液也少加,質控結果不管是正常水平還是病理水平的都可能是在靶值附近的,但是,儀器確實是有問題的。