之前一系列的文章已經(jīng)涵蓋了熒光定量PCR的檢測(cè)試劑評(píng)價(jià)、提取試劑評(píng)價(jià)和PCR儀器的評(píng)價(jià)（檢測(cè)系統(tǒng)評(píng)價(jià)系列）。但是這仍然解決不了臨床上遇到的所有問(wèn)題，干擾試驗(yàn)也是大家比較關(guān)心的一個(gè)熱點(diǎn)。我試著根據(jù)已有的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)分享下我對(duì)于PCR干擾實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路。 一、PCR試驗(yàn)的干擾物 1.內(nèi)源性干擾物 endogenous interferent 體內(nèi)樣品中出現(xiàn)的物質(zhì)，可干擾對(duì)其他物質(zhì)的檢測(cè)。 血液：血紅素（>1mg/ml），氯高鐵血紅素(>0.1ng/μl)，甘油三酯，IgG等； 尿液：尿素（20mM）； 糞便：植物多糖、膽酸鹽； 組織：蛋白酶、膠原蛋白； 奶：蛋白酶、鈣離子； 藥物：抗生素、抗病毒藥、激素類(lèi)等。 其他。 2.外源性干擾物 exogenous interferent 來(lái)自于體外可干擾其他物質(zhì)的檢測(cè)的物質(zhì)。樣本添加劑及在樣本采集與處理過(guò)程中可與之接觸的物質(zhì)： 試驗(yàn)用品：血清分離膠，樣本采集容器及膠塞、導(dǎo)管、導(dǎo)管沖冼液、手套粉末等。 抗凝劑：肝素（>0.1 U/mL）、EDTA（>0.5 mM）等； 有機(jī)溶劑：異丙醇（>0.1 IU/ml）、甜菜堿、二甲基亞砜、甲酰胺、甘油、PEG等； 消毒劑：醇類(lèi)（乙醇>1%）、醛類(lèi)、酚類(lèi)（苯酚>0.2%）、過(guò)氧化物類(lèi)、強(qiáng)酸（HCL）、強(qiáng)堿（NaOH）等; 去污劑：SDS（>0.005%）; 土壤：腐殖質(zhì) 染料：靛青 其他。 在實(shí)際的戶(hù)外采樣條件下，如采集環(huán)境樣品，樣品中可能含有多種干擾物，并且每個(gè)場(chǎng)所的干擾物組成都各不相同，這就需要因地制宜的開(kāi)展PCR干擾實(shí)驗(yàn)。 二、干擾物的試驗(yàn)濃度 干擾物的實(shí)驗(yàn)濃度確定原則
三、干擾物樣品的制備 1、基礎(chǔ)樣本 從未服用過(guò)藥物的健康人群中采集新鮮標(biāo)本（血清、尿液等），將標(biāo)本混勻后即成為基礎(chǔ)樣本。 如新鮮標(biāo)本難以取得，也可采用冰凍或凍干樣本。但應(yīng)注意這類(lèi)樣本中含有防腐劑與穩(wěn)定劑或其他可能會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響的成分。因此在應(yīng)用此類(lèi)樣本之前應(yīng)參照相應(yīng)國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 確定基礎(chǔ)樣本中的被測(cè)量濃度，可通過(guò)添加純分析物使樣本中被測(cè)量濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平。 2、干擾物原液 干擾物質(zhì)的純品多為固體，需要用適當(dāng)?shù)娜軇⑵淙芙?，制成干擾物原液。如所用的是藥品級(jí)制品，應(yīng)注意所含賦形劑、防腐劑、殺菌劑、抗氧化劑、著色劑、調(diào)味劑、金屬氧化物、填充物等對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成的影響。 溶劑應(yīng)使干擾物充分溶解且不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。常用溶劑有純水、HCl 或NaOH溶液、乙醇或甲醇、丙酮、二甲基亞砜等。 原液濃度應(yīng)至少20倍于實(shí)驗(yàn)濃度，以減少對(duì)基礎(chǔ)樣本基質(zhì)的稀釋。應(yīng)注意防止有機(jī)溶劑的揮發(fā)并考慮其在水中的溶解度。 3、實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本 以20倍于實(shí)驗(yàn)濃度的干擾物原液為例，實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本的制備方法見(jiàn)下表。注意樣本制備時(shí)取樣體積； 實(shí)驗(yàn)樣本與對(duì)照樣本的制備方法
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